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PCR儀的擴增產(chǎn)物出現多條帶問(wèn)題解析

發(fā)布時(shí)間： 2020-10-23　　點(diǎn)擊次數： 2543次
 　　PCR儀是利用DNA聚合酶用于擴增特定的DNA的片段，對特定基因做體外大量合成，可以將一段基因復制為原來(lái)的百億至千億倍。利用酶融合技術(shù)，梯度PCR儀可獲得更快、更好結果;其可靈活配備96和384孔加熱模塊并具優(yōu)異的梯度功能，用于加速實(shí)驗方案開(kāi)發(fā)。7"高分辨率觸摸屏，配備智能向導，幫助您根據實(shí)驗室條件創(chuàng )建適合的PCR實(shí)驗方案。
　　PCR儀的擴增產(chǎn)物出現多條帶，這是怎么回事呢？
　　1.引物用量偏大，引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。
　　2.循環(huán)的次數過(guò)多。適當增加模板的量，減少循環(huán)次數。
　　3.酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好，應降低酶量或調換另一來(lái)源的酶。
　　4.退火溫度偏低，退火及延伸時(shí)間偏長(cháng)。應提高退火溫度，減少變性與延伸時(shí)間，也可采用二種溫度的PCR擴增。以2度為梯度設計梯度PCR反應優(yōu)化退火溫度。
　　5.樣品處理不當。
　　6.Mg2+濃度偏高，因適當調整Mg2+使用濃度。
　　7.若為PCR試劑盒，也可能時(shí)試劑盒本身質(zhì)量有問(wèn)題。
　　8.復制提前終止。使用非熱啟動(dòng)的聚合酶時(shí)常有發(fā)生。冰上準備反應體系或采用熱啟動(dòng)聚合酶。
　　9.反應緩沖液未*融化或未充分混勻。確保反應緩沖液融化*并*混勻。
　　10.引物特異性差。檢查引物特異性或重新設計引物。
　　11.引物量過(guò)多。減少反應體系中引物的用量。
　　12.模板量過(guò)多。質(zhì)粒DNA的用量應＜50ng，而基因組DNA則應＜200ng。
　　13.外源DNA污染。確保操作的潔凈。
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