發(fā)布時(shí)間: 2022-11-08 點(diǎn)擊次數: 800次
DNA提取試劑盒是如何從動(dòng)物組織中提取基因組DNA的
DNA提取試劑盒是根據氯化芐法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯芐的這一特性,將植物樣品凍結融解后,再使用PipetTip的端將植物樣品在Microtube壁上數次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經(jīng)過(guò)了改良,熱處理時(shí)間只需15分鐘,使用本制品從實(shí)驗開(kāi)始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴增及限制酶處理等。
DNA提取試劑盒如何從動(dòng)物組織中提取基因組DNA:
使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí):
?、偃?~100mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。
注)下列組織請加液氮研磨至粉末狀。
A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
C.富含角質(zhì)蛋白的組織或堅硬的組織(如骨骼)等。
?、诩尤?50μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,溫和研磨30秒鐘。
注)使用上述①-注)的實(shí)驗材料時(shí),請在加入SolutionA及RNaseA1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
?、凼占?50μl研磨好的組織勻漿液移至CollectionTube中。如果勻漿體積不足650μl,請補充SolutionA至650μl,65℃保溫5分鐘。
使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):
?、偃?~100mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預冷的CollectionTube中,用研磨棒快速研磨成糊狀。
?、诩尤?50μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
?、奂尤?50μl的SolutionA將研磨棒上的勻漿沖入CollectionTube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。