德國 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于細胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究，公司擁有強大的研發(fā)團隊，有先進(jìn)的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時(shí)間和成本，使客戶(hù)獲得得高質(zhì)量的實(shí)驗數據。
ChromoTek的產(chǎn)品分類(lèi)：
一、Nano-Trap系列；以產(chǎn)品結合物為標準，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實(shí)驗的Chromobodies(質(zhì)?；蚣毎敌问?；
四、  高品質(zhì)抗體（標簽蛋白抗體和普通抗體）

由一個(gè)重鏈可變區組成的羊駝單域抗體，是目前可以得到的具 有完整功能的穩定的可結合抗原的小單位。分子量?jì)H15 kDa,是 常規IgG抗體分子量的1 /10。

分子量小

»分子量?jì)H15 kDa,是傳統IgG抗體(150 kDa)的1 /10,或Fab片段(50 kDa)的1/3

»結構簡(jiǎn)單穩定，僅一個(gè)重鏈可變區，特異性強

應用廣泛

»免疫沉淀、免疫熒光、超分辨率成像、表面等離子體共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技術(shù)等

穏定性高

»熱穩定性高，可常溫運輸

»化學(xué)穩定性高，可忍受苛刻的緩沖及洗脫條件

多重驗證

»序列明確，結構清晰

»應用驗證

» SCI文獻引用

親和力高

»表位結合能力強，不受空間環(huán)境影響

»更高的組織穿透力

Y Nano-Traps

GFP-Trap —免疫沉淀伴侶

產(chǎn)品特色:

»結構穩定——不會(huì )斷裂，無(wú)普通抗體輕鏈與重鏈污染

»性質(zhì)穩定——耐高溫，耐苛刻的孵育條件和洗脫條件

»親和力高——抓捕牢固不易脫落，可顯著(zhù)縮短反應時(shí)間

應用領(lǐng)域：

» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP

» Mass spectrometry (MS)

» Enzyme activity measurements

» ChIP, RIP, iCLIP 分析

識別GFP衍生物：

» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy

GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder

GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A

» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet

» CFP

» BFP

▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound

Y Spot-Tag®

Spot-Tag® （序列PDRVRAVSHWSS）是基于Spot納米抗體的優(yōu)化試劑，用于多種捕獲和檢 測應用中。

優(yōu)勢

»通用肽標簽，適用范圍廣泛

»針對內源水平的標簽蛋白進(jìn)行了優(yōu)化

»納米抗體技術(shù)實(shí)現高性能

Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS

t t t t

Screened and mutated positions

應用

IP/Co-IP: Spot-Trap®

•單帶純化：下游應用中無(wú)輕鏈和重鏈

•高親和力，N端或C端融合的解離常數KD低至6-7 nM

• 65°C高穩定性，可耐pH范圍4-10

•樹(shù)脂的結合能力2 1.4mg /ml （對于30 kDa的蛋白質(zhì)）

IF/ WB: Spot-Label

偶聯(lián)ATTO594的抗Spot-Tag期米抗體

•更小的連接誤差,更好的組織穿透力

•成像性能優(yōu)異

-用于WB極度敏感

Protein purification: Spot-Cap

基于期米抗體的親和樹(shù)脂

•一步法純化蛋白

Nano-Boosters & Nano-Labels是一類(lèi)熒光探針,通過(guò)將靶標蛋白的羊駝單域抗體VhH與熒光染料偶 聯(lián)在一起，Nano-Boosters能夠增強GFP、RFP等熒光蛋白的信號強度，Nano-Labels則能夠更準確的定 位到靶標蛋白位置。

優(yōu)勢

»增強熒光信號，成像效果更出眾

»熒光基團位移偏差小，定位更準確

»結構小巧且穩定，通透性更佳

應用

»免疫熒光（IF）

»免疫細胞化學(xué)（ICC）

»免疫組織化學(xué)（IHC）

»組織透明三維成像（DISC。）

»超分辨顯微成像（SPM）

Nano-Caps是納米抗體/VhH偶聯(lián)的瓊脂糖珠,可以高效的進(jìn)行一步法純化蛋白。

優(yōu)勢

» 一步法純化蛋白

»高結合力

»可重復使用

»洗脫溫和

應用

»蛋白純化

Chromobodies®是一種熒光納米探針，通過(guò)將羊駝單域抗體VhH與熒光蛋白的基因序列融合在一個(gè)重組 質(zhì)粒來(lái)實(shí)現內源性靶標蛋白在活細胞內的可視化和實(shí)時(shí)分析。

優(yōu)勢

»結枸小巧穩定，易于轉化表達

»活細胞成像，內源性靶標實(shí)時(shí)分析

»超分辨顯微成像，高通量分析

»不干擾內源性靶標蛋白功能

應用

»高通量分析(HCA)

»免疫熒光(IF)

»活細胞成像(Live cell)

»超分辨顯微成像(SPM)

?

Nanobodies / VhHs

GFP VhH 是否結合 protein A 或者 protein G ?

GFP VhH 結合 protein A 但不結合 protein Go

Nano-Traps

GFP-Trap®對于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在親和力上是否有差別？

GFP-Trap®對于C端GFP融合蛋白有稍微更高的親和力?？梢酝ㄟ^(guò)延長(cháng)孵育時(shí)間（15-30min延長(cháng)至l-2h）來(lái)補償這個(gè)差別。

能否用GFP-Trap®直接從組織樣品（例如位于變性緩沖液）中來(lái)純化帶GFP標簽的融合蛋白？

理論上來(lái)說(shuō)GFP-Trap®在苛刻的緩沖液體系（例如含有0.1% SDS或者1M尿素的RIPA ）中恨穩定。

洗脫的GFP-結合蛋白是否會(huì )與lg二抗發(fā)生交叉反應？

GFP-Trap®申的結合蛋白與山羊、小鼠、大鼠或者人的抗體沒(méi)有任何同源性，所以不會(huì )與lg二抗發(fā)生非特異性交叉反應。

GFP-Trap®的載量如何？

通常 GFP-Trap® Agarose 和 GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩 L 懸浮液可以結合 8 卩 g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩 L 懸浮液可以結合1 pgGFPo

Myc-Trap是否識別內源性的c-Myc蛋白？

我們尚未發(fā)現Myc-Trap可以識別內源性的c-Myc蛋白。由于在c-Myc蛋白的三維結構申對于結合Myc-Trap至關(guān)重要的一些抗 原表位被隱藏了，所以在非變性條件下a-Myc蛋白很難被Myc-Trap識別到。

如何將帶Myc標簽的融合蛋白從Myc-Trap上溫和的洗脫下來(lái)？

可以用lx或者2x Myc-peptide競爭性的洗脫。替代性的也可以用8M尿素或者pH2.5的0.2M甘氨酸室溫下洗脫。

Spot標簽該構建到目的蛋白N端還是C端？能否將Spot標簽插入到目的蛋白中間？

N端或者C端都能夠很好的識別。

對于Spot標簽插入到目的蛋白中間的得視情況而定。Spot標簽多肽需要以線(xiàn)性形式存在而且目的蛋白需要易進(jìn)入不能有空間阻 礙。需要插入到足鋸大且無(wú)結構的環(huán)，或無(wú)固有結構的區域或較長(cháng)的linker,才能鋸被Spot標簽抗體識別。

在還原狀態(tài)下該如何將帶Spot標簽的融合蛋白洗脫下來(lái)？

可以用Spot標簽多肽競爭性的洗脫，或者也可以用pH 1210mM NaOH洗脫（洗脫之后需立即調整pH ）。