發(fā)布時(shí)間: 2020-05-06 點(diǎn)擊次數: 1131次
PCR儀根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以分普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類(lèi)。
一般把一次PCR擴增只能運行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,稱(chēng)之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡(jiǎn)單的,對目的基因退火溫度的擴增。主要應用于科研、教學(xué)、臨床醫學(xué)、檢驗、檢疫等。
PCR儀的PCR反應過(guò)程與細胞內的DNA復制相似,但PCR的反應體系要簡(jiǎn)單的多,主要包括DNA靶序列、引物、4種單核苷酸dNTP、耐熱DNA聚合酶以及合適的緩沖液體系。
PCR反應過(guò)程有以下3個(gè)步驟:
1.變性
將反應體系混合物加熱到94℃,維持較短時(shí)間(大約15-30 s),使目標DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA作為反應模板。
2.退火
將反應體系冷卻至特定的溫度(引物的TM值左右或以下),引物與DNA模板的互補區結合,形成模板引物復合物。
3.延伸
將反應體系的溫度提高到72℃并維持一段時(shí)間,引物在耐熱聚合酶的作用下,以引物為固定起點(diǎn),以4種單核苷酸(dNTP)作為底物合成新的DNA鏈。
以上三步驟作為一個(gè)循環(huán)重復的進(jìn)行,每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一循環(huán)的模板。如此循環(huán)數十次,從而使目的基因得到指數級擴增,達到檢測或獲取基因的目的。